大肠杆菌BBF生长因素的反复探索

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建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生物膜(BBF)模型，调查注射双黄连对BBF的影响和抑制作用。

1.BF模型的建立。

1.1.1.大肠杆菌0恒温振荡器(230~240转/分钟)大肠杆菌B复活粉中溶解后，在37℃温度振荡器(230~240转/分钟)中培养8小时，分装离心。

1.1.2建立大肠杆菌BBF型的方法将放置在-80℃冰箱中的大肠杆菌划在NB培养基的平板上，放置在恒温培养箱中，36℃培养24小时。将平板上的单个菌落溶解在5mlNB液体培养基中，在36℃恒温振荡器中振荡8小时，获得单克隆细菌增殖培养的菌液备用。

将菌液稀释100倍，放入96孔板中，以NB培养基为空白。放入恒温培养箱中，在36℃下培养24小时，取出。将菌液倾倒，用蒸馏水反复清洗，加入0.1%结晶紫染色30分钟后，将结晶紫倾倒洗净，加入1%脱氧胆酸钠溶液，30分钟后测量600nm处的OD值。以菌液浓度为横坐标，以OD值为纵坐标，调查BBF生长情况。

1.通过对大肠杆菌BBF生长因素的反复探索，我们发现影响大肠杆菌BBF生长的主要因素如下：不同的大肠杆菌对BBF有很大的影响，直接影响BBF的生长和BBF的形成。而且大肠杆菌代代相传的越多，BBF的生长越差，所以我们每次都使用第二代大肠杆菌。

②96孔板材料：不同材料96孔板上不同细菌的生长条件不同。我们选择了市场上常见的三种96孔板，即进口聚氯乙烯（聚氯乙烯）板、国内聚苯乙烯（PS）板、进口聚苯乙烯板和不同材料的96孔板上的大肠杆菌。因此，大肠杆菌在国内PS板上的生长是最好的。

③培养时间：考虑到实验操作时间的可行性，我们选择分别培养大肠杆菌18小时、24小时和36小时，以调查BBF的生长情况。因此，BBF在培养24小时后生长最好。

1.建立金黄色葡萄球菌BBF模型的方法与大肠杆菌基本相同。这里没有详细的介绍。我们仍然调查了96孔板的材料、培养时间和液体浓度，最终确定金黄色葡萄球菌液稀释100倍，在国内PS板上培养24小时，F的生长最好、最稳定。

2.双黄连对BBF的影响。

从C行到0行再到0行行，再到10行，再到10行。

培训方法一:调查对BBF形成的影响。

按照96孔板点样方法1完成后，恒温培养箱按照大肠杆菌BBF模型建立方法放置，36℃培养24小时，以药液浓度为横座标，以平均OD值为纵坐标，绘制图纸，调查对BBF的影响。

培养方法二:调查对BBF的抑制作用。首先，我们将96孔板上的所有菌液放入恒温培养箱中，按照大肠杆菌BBF模型建立的方法，在36℃下培养24小时，取出。此时BBF已经形成，将菌液倾出。按照96孔板点样方法

2.对BBF形状的影响。

图1注射双黄连对大肠杆菌BBF的影响。

将注射用双黄连和水溶解，制成5mg/ml药液，分别培养大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。注射双黄连对大肠杆菌BBF的影响如图1所示。

3.讨论。

1)通过实验探索，建立了可靠稳定的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生物膜(BBF)模型，确定了影响因素。

2)探索96孔板的清洗方法:96孔板的材质是BBF模型成功建立的重要因素。确定96孔板的清洗方法:先在96孔板中加入洗液，浸泡3~5分钟后，用手握住96孔板，将孔内液体甩干；然后用乙醇浸泡24小时，超声20分钟，自然晾干。

3)调查了注射双黄连对BBF形成的影响。得出结论，注射双黄连对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌BBF的形成有明显的抑制作用。

4.结语。

本实验建立了可靠稳定的BBF模型，调查了中药注射双黄连对BBF形成的影响，筛选出能抑制或破坏BBF形成的活性成分，为中药开发治疗慢性传染病的新药提供了新的筛选模型，为科学客观地评价中药在慢性传染病治疗中的作用提供了新的方法。