自体脂肪移植早期血管新生影响

来源:华文易迅 时间:2023-10-30 09:00:02

脂肪自体移植已有数百年的历史，由于其来源丰富、取材方便、外形饱满、不发生排异反应等特点，一直受到整形美容外科医师的重视，但移植脂肪成活率低，又严重限制了其在临床的广泛应用[1]。已有研究显示，血供是脂肪移植的关键，而促进离体组织毛细血管生长的因素是非常重要的，一种血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，众所周知，VEGF是最强的促进血管再生因子。但由于其体内半衰期短，降解速度快，因此对其进行了研究。通过建立自体脂肪移植模型，在移植后局部注入HA和VEGF的复合载体，利用VEGF促进毛细血管再生，改善组织供血，提高移植成功率。目的：探讨HA的缓释作用以及HA-VEGF对大鼠自体脂肪移植早期血管新生的影响。

1信息和方法。

1.1资料

1.1.1实验对象和分组。

48只无雌雄Wistar大鼠体重(25020g)g采用随机对照设计，将大鼠分为3组，每组16只，并编号。

1.1.2主要试剂和仪器。

VEGF、HA、免疫组织化学CD34即用SABC试剂盒(武汉博士公司)；温控箱、振荡器等。

1.1.3配制试剂。

空白对照组：09%氯化钠注射液20ml,4℃保存。VEGF对照组：2ugVEGF与0ml0.9%氯化钠注射液配制成100ng/mlVEGF10ml,4℃保存。HA-VEGF缓释体：将500mg干粉与10ml0.9%氯化钠注射液搅拌10分钟后混匀，于4℃静置24h。以200ng/mlVEGF10ml与上述HA溶液混合10分钟，振荡10min,4℃保存，待用。

1.1.4动物模型制作。

用10%水合氯醛0.4ml/100g麻醉大鼠腹腔麻醉，固定，脱去他的后背毛，把他的背部分为左右两段。在大鼠腹股沟区域，用美兰标记脂肪移植区，用碘伏法消毒，做大约1.5cm的切口，剪开皮肤，分离皮下，去除腹股沟脂肪，用3-0缝合切口。

1.1.5移植脂肪颗粒的制备。

用无菌PBS液体漂洗几次，直到没有血迹，切碎成1mm×lmm×lmm的小块或糊状，仔细去除血管和纤维条索样结缔组织，加入Ⅰ型胶原酶0.15%,37℃消化后1h停止。经1500r/min离心10min，反复3次，弃上清后，准确量取脂肪颗粒0.5ml，分成2份。

1.1.6使用药物的方式。

大鼠背脊两侧，距正中线约2ml对称位置设计切线。将皮下组织沿着切口线方向沿着头部侧钝性分离出皮下组织(次不含脂肪)，宽度约为1cm，长度约1.5cm。使用1ml注射器准确取0.5ml备用脂肪微粒，均匀注入所设计的皮下通道。3-0丝线封闭切口。各类药物100ul沿切口缘均匀注入通道，纱布包裹固定。

1.2方法

1.2.1脂肪移植率计算。

移植物的存活率以脂肪重量变化表示。手术后7天，14天，28天，脂肪移植处切开皮肤，沿被膜分离出脂肪移除包膜和称量。脂重比较法：根据Nishimura提出的修正重量比(CorrectedWeightRatio)，移植物重量变化的百分比与增加动物体重百分比的比率来确定。

1.2.2毛细管密度计数。

手术后3天、5天、7天、9天、14天、7天、14天。HE染色后，随机选择6种视野范围内的毛细血管横切面的数目，求得平均值。

1.2.3CD34免疫组织化学染色。

手术后3天，5天，7天，9天行免疫组化染色，观察CD34在内皮细胞表面的表达。选择合适的视场摄像机，在HMIAS-2000高清彩色医学图文分析系统中，用积分光密度计算各组片的阳性表达率。

1.3统计处理。

用SPSS13.0软件包对数据进行处理。不同组间的同一时相、组比较采用t检验，三组间的比较则单因素方差分析，P<0.05认为差异有显著性。

2结果

2.1脂肪中心区移植脂肪成活情况不同程度坏死，坏死区呈淡黄色液化状，周围脂肪颗粒正常，实验组脂肪坏死部位肉眼观察到较其它两组更小，比较三组脂肪重量变化情况：实验组脂肪存活率显著高于空白对照组及VEGF对照组(P<0.05)。VEGF组脂肪存活率显著高于空白对照组，有显著性差异(P<0.05)。(见表1)

目的：探讨HA-VEGF缓释体对脂肪移植存活率和移植血管再生的影响。

表格1移植脂肪重量变化。

2.2移植脂肪毛细血管再生情况：HA-VEGF缓释体系中HA-VEGF缓释体系中的毛细血管数量较多，管径较小的移植脂肪边缘更明显。近中区的血管数目多于空白组和实验组。在空白对照组，毛细血管数目较少，直径较大，脂肪中心区的血管数目较少。选择适当的视野计数毛细管数目。实验组毛细血管平均数目显著高于空白对照组和VEGF对照组。VEGF组平均毛细血管数显著高于空白对照组，差异有显著性(P<0.05)。(见表2)

关于HA-VEGF缓释体对大鼠脂肪移植存活率和移植血管再生的影响(表2)研究了HA-VEGF缓释体对大鼠脂肪移植的影响。

2.3CD34免疫组织化学染色观察结果。

CD34免疫组化染色：选取移植脂肪中部区域，可见大小不等的脂肪细胞，形态不规则，全部血管均呈黄褐色。更小的血管管腔由染黄黄色的内皮细胞包围，部分无管腔，呈条索状，有的仅见单个或成团的内皮细胞。大型血管壁呈棕黄色，中央偶见各种形状的红细胞。实验结果表明，缓释体系组的染色深度明显高于空白对照组及实验组(P<0.05)。VEGF组显著高于空白对照组(P<0.05)。