薄荷醇和水杨酸甲酯两种成分分析

来源:华文易迅 时间:2023-09-25 09:00:02

本品是以国家现有药品标准品种“活络油”为基础，保持其原处方，制备工艺和给药途径不变，改进了剂型，并通过进一步实验，得到了松节油、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯等挥发性物质，本品有舒筋活络、祛风散瘀之功效。为控制产品质量，分别对其中薄荷醇和水杨酸甲酯两种成分进行定量分析，并参照活络油质量标准对原方法进行了修订，本文采用毛细管气相色谱内标法，一次进样同时测定两种成分的薄荷脑和水杨酸甲酯。回收率、精密度等符合分析要求。

1仪器.试剂及检验文件代写。

1.1仪器。

Agilent6890N气相色谱仪，FID检测器，Agilent色谱工作站。EG-120G(日本岛津)电子分析天平(BD211D)。

1.2控制剂。

本品为水杨酸甲酯对照品，由中国药品生物制品检验中心供应。

1.3试剂和溶剂。

萘类(内标)石油醚Ⅱ是分析纯。

1.4样品。

活络膏样(批号：20080501.20080502.20080503)及各种原料均由香港英吉利制药厂有限公司提供。

2方法和结果。

2.1色谱条件。

因为试验液选择了不同于原液中活络油的溶媒，因此本研究基于本产品实际实验体系的适应性，选择PEG-20M毛细管柱30m×0.25mm×0.25μm色谱柱，程序升温，启动温度80℃。维持5min后每分钟升高15℃，5℃停止温度190℃8min和50∶1。探测器温度为300℃，进样口温度为250℃。上述色谱条件下，样品中的组分完全分离，见图1。

2.2溶液的制备。

2.2.1内标液与对照液的配制。

将萘适量，以石油醚Ⅱ型制得20mg/ml溶液，摇匀，作内标液。又取30mg。薄荷脑对照品30mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标液1ml，以石油醚Ⅲ溶解，稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2供试液。

2.2.2.1对供用吸收液的选择，由于本品为含挥发油成分的软膏，根据本品的实际情况，分别对甲苯.正己烷.石油醚Ⅱ.石油醚Ⅲ等溶媒作为吸收液进行提取，并对其中挥发油成分进行测试。目的：研究发现甲苯对该产品中的甲烯醇、桉油精油等成分具有干扰作用，而正己烷和石油醚的沸点降低，溶媒在提取精油时易挥发，造成被测成分的损失；石油醚Ⅲ试验后对本品各组分无干扰，且沸点较高，由于能满足分析的需要，因此本研究选择石油醚III型为供试吸收剂。

2.2.2.2取200mg左右的供试品溶液，精密称定，置于圆底烧瓶中，加水200ml，玻璃珠数粒，烧瓶置电加热套中，连接挥发油测定仪，自测水至刻度3ml，在输液管中加入石油醚2ml，连接回流冷凝管，将烧瓶中的溶液加热至微沸，并保持微沸2h，冷却弃去水相，把石油醚III吸收液经一漏斗，盖上约1g无水硫酸钠，过滤到10ml量瓶内，以石油醚Ⅲ洗涤法进行清洗，将洗涤剂和吸收液合并，精密加入内标溶液1ml，以石油醚Ⅲ稀释至刻度，混合[1]。

2.2.2.3提取条件考察分别对8份样品进行称量(20040501)，按规定进行操作，按1.2.3.4h的提取时间，保持微沸提取挥发性成分。实验证明，样品在加热时，在微沸点2h后，可完全提取样品中的样品。

2.3线性关系检验。

将薄荷脑对照品250mg与水杨酸甲酯对照品约为425mg，精密称定，置入25ml瓶中，将上述溶液用石油醚稀释至刻度，摇匀，精密吸取所述溶液1.2.3.4.5ml，分别置于10ml量瓶中，精加内标液1ml，以石油醚Ⅲ稀释至刻度，精密吸取各浓度对照品溶液1μl，注入气相色谱仪，依法测定。每一进样3次，取峰面面积和浓度的平均值计算，以每一组分峰面积与内标峰面积之比为纵坐标Y。各组分浓度与内标浓度的比值为X，并绘出标准曲线，经线性回归计算，回归方程为：Y=0.80090X-0.00581g/sr=0.99979；水杨酸甲酯：Y=0.52683X-0.00423,r=0.99998。在1.003~5.016mg/ml和1.720~8.598mg/ml的线性范围内，各对照品浓度与其峰面积之间存在较好的线性关系。

2.4精确密度测试。

将薄荷脑与水杨酸甲酯混合对照液分别取1μl后，重复进样6次，薄荷脑和水杨酸甲酯各取0.63%和水杨酸甲酯的RSD分别为0.45%和0.45%。

2.5阴性控制试验。

采用缺薄荷脑、水杨酸甲酯和样品各200mg，按照配制供试品溶液的方法，摇匀。用1μl注入气相色谱仪进行测定，各阴性对照品在水杨酸甲酯的对应位置与样品比较，未发现干扰。

2.6稳定性测试。

将样品溶液放置于室温下，以0.1.2.3.5.8h时按法定方法测定含量，薄荷脑含量的RSD为0.11%，水杨酸甲酯含量的RSD为0.17%，说明溶液在8小时内基本稳定。

2.7重复测试。

采用平行精密称取6份，按法律规定，薄荷脑平均含量为14.1%,RSD为0.16%；水杨酸甲酯平均含量为24.1%,RSD的平均含量为24.1%,RSD为0.41%，表明该方法的重复性好。

2.8回收试验。

在精密称定时，取本品5个(已知含量)，每份精制加薄荷脑对照品15mg，加水杨酸甲酯25mg，置圆底烧瓶中，按规定含量测定。结论薄荷脑提取率高达98.4%,RSD为0.69%，水杨酸甲酯和RSD分别为97.4%和0.78%，结果表明本方法回收率较高，可作为活络膏中薄荷脑含量的测定方法。

3讨论

对薄荷脑.水杨酸甲酯等组分进行GC分析，早期多用填充柱[2]，本研究参考文献[3-10]采用毛细管色谱柱，程序加热方式，两组分均可同时测定一次进样法。分析速度快，结果准确。

干扰性测试：分别以缺额α-大叶桉.樟脑.薄荷脑.水杨酸甲酯、麝香草酚阴性对照品及样品各200mg，摇匀。用1μl注入气相色谱仪进行测定，所有阴性对照品与样品比较，结果表明，该样品的每一个阴性对照品都没有发生干扰现象。